绪论绪论-思考题1、请结合基因工程的概念进行分析：为什么dna双螺旋结构的解析、中心法则的建立和遗传密码的破译是基因工程诞生的理论基础？
2、收集目前已经报道的基因工程安全性的事例，结合其中的部分事例谈谈你对基因工程安全性的认识。
第1章 基因工程的基本技术与原理第1章作业1、简述碱变性法提取质粒dna的基本原理。
2、简述凝胶电泳技术的基本原理。
3、某次pcr未能成功扩增目的片段，试分析可能的原因。
4、简述实时定量pcr分析初始模板浓度的基本原理。
5、简述sanger双脱氧链终止测序技术的原理、过程及其改进。
第2章 基因工程的酶学基础第2章作业1、简述限制性内切核酸酶的命名系统。
2、图示载体和目的基因，分别进行a、b、c三种操作，其最终结果分别是什么？有何差别？ a：用bamhⅰ分别酶切载体和目的基因，凝胶电泳，凝胶纯化dna片段，将两种dna片段混合后用t4 dna连接酶连接。 b：用bamhⅰ分别酶切载体和目的基因，对酶切后的载体片段进行碱性磷酸酶处理，凝胶电泳，凝胶纯化dna片段，将两种dna片段混合后用t4 dna连接酶连接。 c：用bamhⅰ分别酶切载体和目的基因，对酶切后的载体片段和目的基因片段均进行碱性磷酸酶处理，凝胶电泳，凝胶纯化dna片段，将两种dna片段混合后用t4 dna连接酶连接。
3、某同学用5'-gcggaattcatggagcacaattacctccgtt-3'和gaaggatccttagtcctgaccaagatggt作为引物，通过pcr获得了目的基因，进一步通过ecorⅰ和bamhⅰ双酶切、与质粒载体连接、转化大肠杆菌，获得阳性重组子（含目的基因与载体的重组dna的大肠杆菌细胞）。但是，从阳性重组子中提取质粒-酶切-电泳的结果如图，注意，泳道1、2为参考标准；泳道3~6为预期的理论结果；泳道7~10为实际试验结果。请说明试验结果，并分析原因。（引物序列中，下划线标示限制酶识别位点，粗体字标示起始密码子和终止密码子，斜体字为答题线索之一，另一答题线索：ecorⅰ在酶用量过高、甘油含量过高、ph值过高等条件下容易出现星号活性，可切割naattn）
4、某同学用5'-gcgtctagatcagcacaattacctccgtt-3'和gaaggatccttagtcctgaccaagatggt作为引物，通过pcr获得了目的基因，进一步通过xbaⅰ和bamhⅰ双酶切、与质粒载体连接、转化大肠杆菌，获得阳性重组子（含目的基因与载体的重组dna的大肠杆菌细胞）。但是，从阳性重组子中提取质粒-酶切-电泳的结果如图，注意，泳道1、2为参考标准；泳道3~6为预期的理论结果；泳道7~10为实际试验结果。请说明试验结果，并分析原因。（引物序列中，下划线标示限制酶识别位点，粗体部分为答题线索；大肠杆菌菌株dh5α含有dam甲基化酶，识别gatc并对第2位的a进行甲基化修饰；xbaⅰ的活性受识别位点处的甲基化影响，而bamhⅰ不受甲基化影响）
5、假如你需要将图示目的基因与pab123载体重组，并使目的基因的起始密码子靠近载体上的启动子。一个简单的方法就是，在引物的5'末端添加限制酶识别位点，通过pcr在目的基因两端引入不同的限制酶识别位点，然后通过两种限制酶双酶切目的基因，并采用相同的限制酶双酶切载体，再进行连接、转化和筛选鉴定。但本题有一些限制因素：1，载体上只有bamhⅰ和hindⅲ这两个限制酶识别位点，其中bamhⅰ识别位点离启动子较近；2，目的基因内部有一个bamhⅰ识别位点，如果采用bamhⅰ酶切，目的基因将被切为长度分别为500 bp和1000 bp的两个片段。根据你所学的基因工程知识，设计几套可行的实验方案，将完整的目的基因插入pab123载体，且使目的基因的起始密码子靠近载体上的启动子（而非转录终止子）。
第3章 目的基因的获取第3章作业1、如何应用错配引发和重叠延伸pcr，在目的基因序列内部引入点突变？
2、理想的基因组文库需具备哪些条件？
3、cdna文库与基因组文库有何区别？
第4章 基因工程载体第4章作业1、基因工程克隆载体应具备哪些基本条件？
2、简述cole1质粒的复制启动过程，并回答：如何改造cole1的复制子以提高质粒拷贝数？
3、puc19质粒载体上有哪些元件？说明各元件的功能。
4、λ噬菌体载体（以及黏粒载体）与外源dna片段重组之后，一般经体外包装、转导而进入大肠杆菌细胞。简述λdna体外包装的原理，并说明体外包装限制问题。
5、pyac2人工染色体载体上有哪些元件？说明各元件的功能。
第5章 基因的体外重组和转移第5章作业1、简述转化率的概念及影响转化率的因素。
2、简述ca2 诱导大肠杆菌转化法的操作过程及原理。
3、例举3种将外源基因导入植物细胞的方法，选择其中1种方法说明其原理。
第6章 重组克隆的筛选与鉴定第6章作业1、例举3种抗生素及其抗性基因，说明抗生素的作用方式及抗性基因的机理。
2、假如你计划通过pcr扩增目的基因，然后用t载体克隆法（ta克隆）将其插入pmd18-t载体（如图），并转化大肠杆菌dh5α。试述你将采用哪些方法来筛选和鉴定期望重组子。
3、什么是报告基因？例举几个常用的报告基因。
第7章 克隆基因的表达第7章作业1、大肠杆菌表达体系常用的启动子有哪些？它们有哪些共同特点？
2、什么是sd序列？原核表达载体上，sd序列应在哪个位置？
3、表达载体上常常含有标签序列，与目的基因融合表达。例举3种标签序列，并简要说明。
4、例举3种酵母表达载体上常用的启动子，并简要说明。
5、例举3种植物表达载体上常用的启动子，并简要说明。
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