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模块一:基础微生物学操作技术

客观题

1、以下是不能保证灭菌的是
    a、培养基高压蒸汽灭菌
    b、水蒸馏灭菌
    c、剪刀高温干热灭菌
    d、土壤高温干热灭菌

2、培养基成为固体的原因是
    a、水分含量低
    b、琼脂
    c、ph
    d、灭菌

3、培养基在锥形瓶中的高度不能超过容器高度的
    a、1/2
    b、装满
    c、1/3
    d、2/3

4、高压湿热灭菌中错误的是
    a、灭菌完成后,立即手动放气
    b、灭菌完成, 压力降为0以后,手动放气
    c、升温前要排锅内冷空气
    d、降温时不用排冷空气

5、关于灭菌正确的说法是
    a、血清可以用高温高压湿热灭菌
    b、抗生素一般过滤除菌
    c、葡萄糖一般121°c,20min灭菌
    d、水一般115°c,15min灭菌

6、关于接种正确的是
    a、连续划线,只挑取了一次微生物
    b、分区划线,挑取了多次微生物
    c、试管接种时,伸入管内的接种棒应该用酒精擦拭灭菌
    d、试管液体接种时候,可以用手拿移液器枪头

7、下图中手机上的微生物培养物,是在何种条件下观察到的
    a、体式显微镜
    b、光学显微镜
    c、荧光显微镜
    d、肉眼

8、光学显微镜的使用正确的是
    a、用手扳动镜头选择工作物镜镜头
    b、体式镜依靠物镜头的旋转放大物像
    c、光学显微镜可以观察微生物的立体空间结构
    d、聚光镜下降可以制造一定的暗视场来观察透明材料

9、干热灭菌适用于
    a、塑料离心管
    b、剪刀
    c、培养基
    d、抗生素

10、关于琼脂的使用，说法正确的是
    a、常温可以溶解于水
    b、煮沸可以融化
    c、零度才能凝固
    d、液体培养基需要加入琼脂

11、划线分离培养的两种方法中错误的描述是
    a、连续划线分离效果好
    b、分区划线分离效果好
    c、连续划线只挑取了一次菌种
    d、分区划线只挑取了一次菌种

12、超净工作台的使用，错误的是
    a、实验前半小时打开紫外灯
    b、实验前半小时打开风机
    c、实验中要打开风机和照明
    d、实验中要关闭紫外灯

13、超净工作台的使用中挡风板的位置
    a、1/3高度
    b、1/2高度
    c、随意高度
    d、全开

14、无菌操作中，正确的是
    a、双手擦过酒精棉，可以接触无菌培养皿内部
    b、双手擦过酒精棉，也只能接触无菌培养皿的外部
    c、接种棒在紫外灯下照射了半小时，可以直接接种了
    d、接种棒用酒精棉擦拭就可以直接接种了

15、无菌枪头已经高压湿热灭菌了，在液体转接中正确的是
    a、可以吸上菌液然后连枪头一起打入培养基中
    b、也不可以吸上菌液然后连枪头一起打入培养基中，因为枪头与移液器接触部分不是无菌的
    c、也不可以吸上菌液然后连枪头一起打入培养基中，因为枪头与移液器接触部分不是无菌的，所以事前把移液器在超净台紫外灭菌半小时就可以了
    d、也不可以吸上菌液然后连枪头一起打入培养基中，因为枪头与移液器接触部分不是无菌的，所以事前把移液器用酒精棉擦拭就可以了

16、光学显微镜的使用中，寻找物像是
    a、在载物台上升过程中
    b、在载物台下降过程中
    c、在载物台不动的过程中
    d、在载物台随意升降过程中

17、关于体视显微镜，正确的说法是
    a、体视显微镜可以观察立体结构
    b、体视显微镜不可以调节焦距
    c、体视显微镜没有物镜头
    d、体视显微镜观察的材料必须制成切片

18、100倍物镜也称油镜，使用时候
    a、需要在镜头上加油
    b、需要在玻片上加油
    c、需要在目镜头上加油
    d、需要在40倍镜头上加油

19、油镜观察时候，必须
    a、镜头浸在油里，增加光强
    b、镜头不能接触油
    c、镜头不能接触油，可以用盖玻片隔开
    d、镜头浸在油里，降低光强

20、显微镜观察使用完毕时，属于错误操作的是
    a、最短物镜头处于工作位置
    b、关闭电源
    c、载物台在最高
    d、载物台在最低

单元作业-主观互评

1、灭菌与消毒的区别？常见的灭菌有几种方式？举例说明分别适用于何种情况？

2、微生物培养基质有哪些种类？

3、琼脂在培养基中的作用是什么？琼脂的融化温度和凝固温度分别是多少？

4、倒制平板的注意事项有哪些？

5、斜面制作要点？

模块二:微生物的培养、制片、染色及显微观察

单元测验

1、霉菌的简单染色一般采用什么染料
    a、乳酸石炭酸棉兰
    b、孔雀绿
    c、美蓝
    d、结晶紫

2、以下哪种霉菌具有假根
    a、酵母
    b、黑曲霉
    c、黑根霉
    d、青霉

3、以下哪种霉菌具有扫帚状分支的产孢结构
    a、黑曲霉
    b、根霉
    c、青霉
    d、放线菌

4、以下哪种不是放线菌的菌丝体组成成分
    a、基内菌丝
    b、孢子丝
    c、气生菌丝
    d、孢子

5、酵母以什么方式进行有性繁殖
    a、出芽
    b、裂殖
    c、接合
    d、芽裂殖

6、可对酵母菌的死、活细胞鉴别常采用哪种染料
    a、美蓝
    b、结晶紫
    c、碱性品红
    d、孔雀绿

7、血球计数板可以对哪种微生物进行计数
    a、金黄色葡萄球菌
    b、放线菌
    c、霉菌
    d、酵母

8、革兰氏阳性和阴性菌的主要差异在于哪里不同
    a、细胞壁
    b、细胞膜
    c、细胞质
    d、细胞核

9、以下哪种菌的观察需要使用油镜
    a、金黄色葡萄球菌
    b、毛霉
    c、青霉
    d、酵母

10、细菌的简单染色中，正确的制片染色方法是
    a、滴水，均匀涂菌，加盖玻片，油镜观察
    b、滴水，均匀涂菌，染色，加盖玻片，油镜观察
    c、滴水，均匀涂菌，吹干或烤干，染色，油镜观察
    d、滴水，均匀涂菌，染色，油镜观察

11、革兰氏染色使用染液的顺序为初染用（），媒染用（），最后复染用（）
    a、结晶紫、碘液、番红
    b、番红、碘液、结晶紫
    c、碘液、结晶紫、番红
    d、番红、结晶紫、碘液

12、微生物次级代谢产物的大量积累在哪个时期
    a、延滞期
    b、对数期
    c、稳定期
    d、衰亡期

13、细菌生长周期分为哪几个时期？哪个时期的代时最短？
    a、延滞期、对数期、稳定期、衰亡期；对数期代时最短
    b、延滞期、对数期、稳定期、衰亡期；衰亡期代时最短
    c、延滞期、对数期、波动期、衰亡期；对数期代时最短
    d、延滞期、对数期、波动期、衰亡期；衰亡期代时最短

14、以下哪些方式可加速载玻片上的酵母死亡
    a、放置于30°c培养箱
    b、灼烧
    c、加入70%酒精
    d、加入消毒水

15、以下属于革兰氏阳性菌的是
    a、金黄色葡萄球菌
    b、枯草芽孢杆菌
    c、大肠杆菌
    d、酵母

16、将培养皿暴露在空气采样时，皿盖朝上

17、霉菌是结构较为复杂的细菌

18、由于霉菌较小，观察其菌丝时需要使用光学显微镜的油镜

19、黑根霉的假根发达，孢子囊簇生

20、黑曲霉的分生孢子梗从足细胞上生出

21、霉菌的菌落大、呈绒毛状、表面干燥

22、用美兰染色区分酵母细胞为活细胞或死细胞时，活细胞染色为蓝色

23、酵母具有无性出芽繁殖和有性接合生殖的繁殖方式

24、用血球计数板计菌体数目，在加入样品前，需静置菌液，以取到尽可能多的菌体

25、放线菌与霉菌不同，在固体培养基表面生长时，菌落质地致密

26、放线菌显微观察时，制片可以采用插片法和印片法

27、放线菌孢子丝遇水后容易解螺旋

28、革兰氏染色成功的关键步骤是乙醇脱水

29、革兰氏阴性菌的革兰氏染色最终体现出来的颜色是初染的颜色

30、进行细菌制片时，通过加热使细胞固定在载玻片上，防止细菌在染色后冲洗步骤中被冲走，同时也可以杀死大多数细菌并且不破坏细胞形态。加热时注意使用镊子和载玻片架，以免烫伤。不要将载玻片在火焰上烧烤时间过长，以免载玻片破裂

31、革兰氏阳性菌若脱色过度，细胞壁被破坏，碘-结晶紫复合物被流出，最终呈现复染的颜色，为假阴性

32、革兰氏染色实验的最后一步复染步骤省略也可以区分革兰氏阴性和阳性菌

33、对嗜盐古菌和嗜热细菌的革兰氏染色观察时，需在同一载玻片上做一份标准菌的革兰氏染色对照

34、极端微生物接种不需要无菌操作

单元作业

1、进行细菌制片时为什么要进行加热固定？在加热固定时要注意什么？

2、2革兰氏染色成功的关键步骤是哪一步？为什么？

3、酵母菌的生殖方式有什么特点？什么是微生物的直接计数法？酵母菌的显微观察方法是什么？如何区分酵母菌的死活？

4、放线菌的菌落形态怎样？微观结构是怎样的？观察放线菌微观结构的方法有哪些？

5、为什么用老龄菌进行革兰氏染色会造成假阴性

6、卢戈氏碘液的作用是？

7、举例说明霉菌、酵母、放线菌、细菌给人们日常生活带来哪些有利不利的影响？实验室培养这些微生物的条件是怎样的?

8、什么是极端微生物？极端微生物的研究有什么价值？极端微生物的显微形态与常规微生物的异同?

模块三: 微生物的分离、培养、鉴定、保藏

单元测验

1、在平板稀释涂布法中，以下哪种数目的菌计数结果较为合适
    a、20
    b、200
    c、2000
    d、5000

2、快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌采用哪种实验
    a、明胶水解实验
    b、淀粉水解实验
    c、糖发酵实验
    d、imvic实验

3、伏-普试验检测细菌利用葡萄糖产生___的能力
    a、非酸性或中性末端产物
    b、甲酸
    c、淀粉酶
    d、乳酸

4、用甘油进行菌种保藏时采用约___%的甘油
    a、10
    b、20
    c、50
    d、60

5、下面哪种菌种保藏方法保藏时间最久
    a、甘油保菌-20°c
    b、甘油保菌-80°c
    c、斜面4°c
    d、穿刺保菌10°c

6、紫外线可通过诱导（）二聚体形成dna的交联，从而抑制dna的合成
    a、胞嘧啶
    b、鸟嘌呤
    c、胸腺嘧啶
    d、腺嘌呤

7、紫外线杀菌作用是因为破坏了细菌的什么结构
    a、dna结构
    b、rna结构
    c、蛋白质结构
    d、多糖结构

8、以下哪种菌能利用柠檬酸盐为碳源
    a、大肠杆菌
    b、芽孢杆菌
    c、产气肠杆菌
    d、乳酸菌

9、采取冷冻保藏法保藏的菌种可以保藏的时间为
    a、1-2个月
    b、6个月-1年
    c、1-3年
    d、10-15年

10、传代培养保藏法适用于经常使用的菌种，一般培养后于（）保存
    a、4℃
    b、-20℃
    c、-80℃
    d、常温

11、平板分离培养得到的乳酸菌菌落，镜检时候，一般可以看到
    a、嗜热链球菌
    b、乳酸杆菌
    c、大肠杆菌
    d、枯草杆菌

12、稀释后涂布的平板没有得到单菌落，可能的原因有
    a、菌液太稀
    b、菌液太浓
    c、没有涂布均匀
    d、涂布均匀

13、紫外线对微生物生长影响的实验中，以下描述正确的是
    a、照射紫外后，需要把遮盖物去除，再去培养
    b、照射紫外后，不需要把遮盖物去除，直接去培养
    c、照射紫外前，需要把遮盖物盖在涂菌后的平板表面
    d、照射紫外前，需要把遮盖物盖在无菌的平板表面

14、倍比稀释时，取1 ml原液加入第二支管的9ml生理盐水中，用该枪头将悬液吹吸混匀后换新枪头吸1 ml加入第三支试管中，依次梯度稀释

15、平板菌落计数法可以计算出活死菌总数

16、平板稀释涂布法时，涂的菌液应尽量多

17、自制酸奶时，在发酵前加越多蔗糖，乳酸菌生长发酵越好

18、兼性厌氧菌在有氧和无氧条件下都能生长

19、平板菌落计数法需要进行稀释培养，只统计出的样品的活菌数

20、紫外线特别是短波紫外线容易被dna吸收，导致突变，从而抑制dna的复制与功能

21、较长波长的紫外线能使色氨酸变为有毒的光产物，有毒光产物和近紫外线一起作用能导致dna链的断裂

22、温度影响微生物细胞的生物大分子（蛋白质及核酸）的稳定性、酶的活性、细胞膜的流动相和完整性等方面有重要影响

23、ph过高或者过低会使蛋白质、核酸等生物大分子所带电荷发生变化，影响其生物活性，甚至导致蛋白质等变性失活，还可以引起细胞膜电荷变化，影响细胞对营养物的吸收，同时还改变环境中营养物质的可给性及有害物质的毒性

24、平板上变色感应菌株的多少与菌体群体感应信号的合成情况成正相关

25、微生物能够直接利用大分子物质

单元作业

1、哪些因素可以影响微生物的生长，影响的机理是什么？

2、酸乳形成的原理？什么是微生物的活菌计数法？什么是菌落形成单位？

3、微生物的生理生化鉴定有什么意义？在各种鉴定反应中，大肠杆菌应该什么表现？

4、微生物的菌种保藏原则是什么？四大类微生物的甘油低温冻藏方法简要步骤？

5、常用的测定细胞数目的方法有哪几种？为了确定正在生长着的菌体的生长阶段，一般用哪种方法？

6、比较平板计数法和直接计数法的优缺点及应用

7、细菌生长周期分为哪几个时期？哪个时期的代时最短？

8、微生物信号是什么？查阅资料总结和评价现有的测定方法。

模块四: 微生物的分子遗传技术

单元测验

1、egfp绿色荧光蛋白在细菌中是否表达可使用（）灯照射观察到
    a、红光
    b、蓝光
    c、紫光
    d、日光

2、氨苄青霉素的抑菌原理是抑制细菌（）的合成
    a、线粒体
    b、核酸
    c、蛋白质
    d、细胞壁

3、化学感受态的热激温度为
    a、37℃
    b、42℃
    c、50℃
    d、25℃

4、在本实验中，筛选pgex-4t-egfp表达egfp需要怎样的平板
    a、氨苄青霉素 x-gal
    b、氨苄青霉素 iptg
    c、阿拉伯糖 iptg
    d、阿拉伯糖 x-gal

5、制备好的感受态细胞长期储存应放在
    a、4℃
    b、-20℃
    c、-80℃
    d、常温

6、影响转化率的首要因素是
    a、供体dna的含量
    b、受体菌的生理状态
    c、受体菌的浓度
    d、受体菌的体积

7、溶源细菌经过诱导后的培养，是为了
    a、让细菌恢复正常生长
    b、让噬菌体大量繁殖
    c、让细菌产生噬菌斑
    d、让噬菌体再次溶源

8、λ噬菌体的转导为____转导
    a、普遍性
    b、局限性
    c、局部性
    d、广泛性

9、分子量相同，超螺旋、线性及开环构型不同的质粒dna分子，电泳速度最慢的是哪种
    a、超螺旋
    b、线性
    c、开环
    d、速度相同

10、含x-gal基因的噬菌体转导子的鉴别使用（）平板培养
    a、半乳糖制作的emb平板
    b、乳糖制作的emb平板
    c、半乳糖制作的lb平板
    d、乳糖制作的lb平板

11、噬菌体转导的方法有
    a、涂布法
    b、划线法
    c、点滴法
    d、稀释法

12、本实验中使用的绿色荧光蛋白egfp和红色荧光蛋白rfp的最大吸收光谱分别为（）、（）
    a、568 nm
    b、480 nm
    c、568nm
    d、380nm

13、噬菌斑是噬菌体侵染并裂解细菌后,在培养基质中出现的菌斑

14、细菌转化是外来dna进入细菌中并表达的过程

15、碱裂解法提质粒，加入溶液ii，剧烈震荡以保证充分混匀

16、溶源状态的细菌，噬菌体的基因组整合到细菌基因组上，与细菌一起复制

17、原核生物16s rdna大小约为200 bp

18、分离dna片段采用琼脂糖凝胶电泳，属于垂直电泳

19、微生物的分子鉴定，测回来的序列可以在（ncbi）网站上对比序列相似度

20、制备含有抗生素的固体平板时，需要在融化固体培养基后立即加入相应浓度抗生素，以确保抗生素与培养基混合均匀

21、溶源细菌在紫外照射下，诱导噬菌体进入烈性阶段，不需要避光培养

22、单层平板测定噬菌体效价时，不产生噬菌斑

23、采用诱导型启动子表达蛋白时需要加入相应的合适浓度的诱导剂方可使蛋白高效表达

24、制备含有抗生素的固体平板时，需要在融化固体培养基后立即加入相应浓度抗生素，以确保抗生素与培养基混合均匀

25、dna分子在琼脂糖凝胶电泳中的效应有电荷效应和分子筛效应

单元作业

1、噬菌体效价的定义是什么？效价测定通常采用什么方法？

2、噬菌斑是怎样形成的？在测定噬菌斑时，双层平板制作的要点有哪些？噬菌体转导的原理是什么？转导效率如何计算？

3、细菌的转化原理是什么？转化方法有哪些？转化子如何鉴别？

4、微生物的分子鉴定原理是什么？简述完整技术路线。

5、碱裂解法提质粒溶液i、ii、iii的作用

6、简述pcr原理、过程、应用