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1 无菌操作技术与主要仪器设备的使用

无菌操作技术与主要仪器设备的使用单元测验

1、1. 使用超净工作台进行无菌操作实验前，至少开启紫外灯照射杀菌 。
    a、5min
    b、15min
    c、30min
    d、10min

2、制作固体平板时，加入抗生素时所用培养基的适宜温度一般为 。
    a、20-30℃
    b、30-40℃
    c、50-60℃
    d、70-80℃

3、制作酒精棉球常用的酒精浓度为 。
    a、50%
    b、75%
    c、85%
    d、95%

4、配制lb固体培养基常用的琼脂浓度为 。
    a、1.0-2.0%
    b、4%
    c、3%
    d、0.3%

5、lb培养基灭菌的常用方法是 。
    a、紫外线消毒
    b、煮沸法灭菌
    c、高压蒸汽灭菌
    d、干热灭菌

6、琼脂在lb固体培养基中的作用是提供 。
    a、碳源
    b、氮源
    c、生长因子
    d、凝固因子

7、关于视频中溶液的配制，下列说法正确的是 。
    a、配制溶液时，一般先调ph，然后再定容。
    b、使用酚-氯仿-异戊醇溶液时，需要吸取下层溶液使用。
    c、配制溶液ⅰ时，可以使用0.5mol/l edta母液配制，也可以加入已称量好的edta干粉配制。
    d、配置好的50mg/ml羧苄青霉素溶液，可以直接使用，不用过滤除菌。

8、使用离心机时，一定要将同样重量的离心管对称放入离心转子内让离心机的轴受力平衡。

9、电子天平使用时一定要调水平，并依据称量需求选择不同精度和量程的天平。

10、高压灭菌结束后，压力降到0 mpa时就可以从高压锅内取出灭菌物品。

11、配制edta溶液时，edta在碱性条件下才能溶解。

12、以水为溶剂配制的抗生素溶液需要过滤除菌后才能使用。

13、一般tris 饱和酚用于分离 dna，水饱和酚用于分离rna

2 琼脂糖凝胶电泳和sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳单元测验

1、试写出琼脂糖凝胶电泳分离dna的原理。

2、在琼脂糖凝胶电泳中，dna marker所起的作用是什么？

3 目的基因akp扩增及pcr产物的检测与回收

目的基因akp及pcr产物的检测与回收单元测验

1、有关pcr的描述，错误的是 。
    a、pcr反应是一种酶促反应
    b、一般选用94℃进行模板变性
    c、扩增的对象是dna序列
    d、扩增的对象是氨基酸

2、pcr实验的特异性主要取决于 。
    a、dna聚合酶的种类
    b、反应体系中模板dna的量
    c、引物序列的结构和长度
    d、四种dntp的浓度

3、pcr产物短期存放的最佳温度条件是 。
    a、4℃
    b、常温
    c、-80℃
    d、高温

4、taq dna聚合酶的最适温度是 。
    a、37℃
    b、50-55℃ 
    c、70-75℃ 
    d、80-85℃

5、pcr产物回收的目的是 。
    a、去除taq酶
    b、去除多余的引物
    c、去除大部分非特异性pcr产物
    d、回收特异性pcr产物

6、关于凝胶中dna回收的说法，正确的是 。
    a、高盐吸附，低盐洗脱
    b、吸附柱中含有能可逆吸附dna分子的基质
    c、膜结合液中含乙醇
    d、漂洗液中含乙醇

7、pcr中的引物是一小段同dna互补的rna分子。

8、pcr反应的循环过程包括变性、退火和延伸。

9、pcr具有特异性、高效性和操作简单等特点。

10、凝胶成像仪可直接用来检测pcr产物回收是否成功，且用于检测的产物还能在后续基因克隆实验中直接使用。

4 质粒dna提取及电泳检测

质粒dna提取及电泳检测单元测验

1、用碱裂解法提取质粒dna的基本原理是 。
    a、染色体dna断裂成碎片
    b、染色体dna分子量大不能释放
    c、染色体dna变性后不如质粒dna复性快
    d、染色体未与蛋白质分开而沉淀

2、提取质粒dna过程中，向氯仿-异戊醇处理的上清液中加入无水乙醇的主要目的是 。
    a、去除蛋白
    b、去除断裂的基因组dna
    c、浓缩和沉淀质粒dna
    d、去除rna

3、rte试剂中能抑制dna酶活性的化学物质是 。
    a、edta
    b、rna酶
    c、tris
    d、盐酸

4、关于碱裂解法分离质粒dna的说法，错误的是 。
    a、溶液ⅰ的作用是悬浮菌体
    b、溶液ⅱ的作用是使dna变性
    c、溶液ⅲ的作用是使dna复性
    d、质粒dna分子小没有变性

5、碱裂解法提取质粒时，裂解大肠杆菌所需要的成分是 。
    a、0.2m naoh
    b、0.4m na2co3
    c、0.4m nahco3
    d、1.0% sds

6、质粒dna提取过程中可以使用旋涡振荡的操作步骤包括 。
    a、菌体重悬
    b、加入溶液ⅱ后的菌体裂解
    c、加入溶液ⅲ后的混匀中和
    d、加入75%乙醇清洗沉淀的质粒dna

7、碱裂解法分离质粒dna是根据质粒dna与染色体dna的分子量差异而设计的。

8、染色体dna与蛋白-sds钾盐结合在一起形成微溶性复合物，离心后沉淀中含有染色体dna，而上清中含有质粒dna。

9、碱裂解法提取的质粒dna分子全部具有超螺旋结构。

10、酚-氯仿-异戊醇试剂中氯仿的作用是使水相和有机相分界更为明显。

质粒dna提取中，溶液ⅰ、ⅱ、ⅲ的作用各是什么？

1、质粒dna提取中，溶液ⅰ、ⅱ、ⅲ的作用各是什么？

2、小明从大肠杆菌中提取质粒后，进行琼脂糖凝胶检测，发现有3个条带，请给出合理解释，并分析每条带的含义。

3、加入溶液i之后，为什么不能用涡旋振荡器混匀样品而是轻缓混匀？

5 重组dna的制备及大肠杆菌感受态细胞的转化

重组dna的制备及大肠杆菌感受态细胞的转化单元测验

1、需要atp作为辅助因子的酶是 。
    a、bamh i
    b、hind iii
    c、t4 dna 连接酶
    d、ecor i

2、能产生平末端的限制性内切酶是 。
    a、ecor i
    b、bamh i
    c、hind iii
    d、alu i

3、用于转化大肠杆菌感受态细胞且能在平板上长出菌落的物质是 。
    a、质粒dna
    b、目的基因
    c、基因组dna
    d、cdna

4、在蓝白斑筛选中，可做为β-半乳糖苷酶的底物是 。
    a、iptg
    b、x-gal
    c、磷酸钠
    d、edta

5、hindiii的同裂酶 是 。
    a、bamh i
    b、xhoi
    c、ecor i
    d、hsui

6、大肠杆菌热激转化实验过程中，常用的热激温度和时间分别是 。
    a、80℃ 90 s
    b、4℃ 90s
    c、42℃ 90 s
    d、70℃ 90 s

7、制备大肠杆菌感受态细胞的实验操作过程中，需要注意 。
    a、无菌
    b、动作轻柔
    c、冰浴保持低温
    d、可以使用旋涡振荡仪振荡混匀

8、大肠杆菌感受态细胞制备及转化的步骤包括 。
    a、细胞扩增
    b、感受态细胞制备
    c、转化
    d、复苏

9、星号效应是在非最优条件下某些限制性内切酶对识别和切割序列的特异性下降的现象。

10、限制性内切酶对粘性末端和平末端切割效率没有区别。

11、在连接质粒和外源dna的限制性内切酶酶切后的片段时，应该把此两种dna按1:1的摩尔比混合进行连接反应。

12、在转化过程中，热激后加入lb液体培养基进行复苏，复苏可以使细胞得到修复，同时使抗性基因得到表达

dna重组

1、设目的基因（1600bp）浓度为80ng/ul, 载体（3500bp）浓度为200ng/ul。将目的基因与载体按约6：1摩尔比进行连接，连接体系共10ul，其中10xbuffer 1ul t4连接酶1ul，则目的基因和载体分别取多少ul？

大肠杆菌感受态细胞

1、在进行外源基因克隆表达时，一般受体细胞应具备什么条件？